更天时，忽听帐外有人进来唤周都督。周瑜醒来，故意问道：“床上睡着何人？”来人答道：“都督请子翼同寝，何故忘却？”周瑜懊悔道：“我平日未尝饮酒，昨日醉后失事，不知可曾说甚言语？”那人道：“江北有人来此。”周瑜喝道：“低声！”便唤子翼。蒋干只装睡着。周瑜与那人悄悄走出帐外。蒋干也起来窃听，只听外面有人说道：“张、蔡二都督道，急切不得下手……”后面言语颇低，听不清楚。不一会儿，周瑜入帐，又唤子翼，蒋干只是不应，蒙头假睡。周瑜也解衣就寝。蒋干寻思：周瑜是个精细人，天明若发现书信不见，必然害我。睡至五更，蒋干再也不能入睡，遂起床，唤周瑜，周瑜睡得正酣。于是赶紧穿上衣服，潜出帐外，唤了小童，径直回江北去了。
蒋干一下船，就赶紧去见曹操。曹操问道：“子翼干事如何？”蒋回答道：“周瑜雅量高致，非言辞所能动也。”曹操很不高兴。蒋干又说道：“虽不能说动周瑜，却与丞相打听得一件事。乞退左右。”于是蒋干取出书信，将此去江东的情况悉数说与曹操。曹操一听，十分震怒，大骂道：“二贼如此无理也！”当即便传唤蔡瑁、张允到帐下，喝令武士将二人推出斩首。当武士将二人首级献上时，曹操才猛然醒悟，大叫道：“吾中计矣！”
周瑜所派细作探知此事，立即回报江东。周瑜大喜道：“吾所患者，此二人也，今既已剿除，吾无忧矣。”周瑜的这一反间计用得十分高明，就连他自己也说：“吾料诸将不知此计，独有诸葛亮识见胜过我，想此谋也不能瞒过他也。”此番周、蒋斗智，相互诈骗，其智其愚，写得十分精彩。周瑜之智，妙在先说破蒋干是说客，使他开口不得；又妙在说他不是说客，益发使他开口不得。周瑜诈睡以骗蒋干，蒋干也以假睡骗周瑜。周瑜假呼蒋干，是明明知道他在假睡；蒋干不答应周瑜，则是不知周瑜假呼唤。周瑜之醉，醉却是醒；蒋干之醒，醒却是醉。周瑜在梦中呼子翼、骂曹操，使蒋干十分疑惑，醒来后又做出忘却呼子翼、骂曹操的样子，更使蒋干疑惑。周瑜作假，表面上极其粗疏，实际上却步步紧密；蒋干自以为极其聪明，却步步呆愚。
其实曹操也是使用反间计的老手。曹操虽然中了周瑜的反间计而误杀两员水军大将，但他也曾成功地运用反间计离间马超和韩遂的关系。马超与西凉太守韩遂联合，兴兵反曹。曹操认为马超虽然勇武过人，但乃一介勇夫，不识机谋。韩遂的父亲与曹操同年举孝廉，彼此相识。曹操决定用反间计，离间马超与韩遂的关系。双方摆开战阵，曹操单骑出阵，曹操派人过阵对韩遂说：“丞相谨请韩将军会话。”韩遂见曹操单骑一人，并无甲仗，也换下衣甲，轻服匹马而出。二人马头相交，曹操却与他拉起家常旧事，绝口不谈军情。言谈之中，不时放声大笑。相谈有一个时辰，方回马而别，各自归寨。早有人将此事报与马超，马超赶忙来问韩遂：“今日曹操阵前所言何事？”韩遂说：“只是谈些京师旧事而已。”马超说：“难道没有谈及军务吗？”韩遂回答道：“曹操不言，吾何独言之？”马超心中泛起疑团，不言而退。
曹操回寨以后，又给韩遂写了一封书信，信中有很多朦胧的字眼，在一些关键之处，还故意涂抹改易。然后派人给韩遂送去，又故意让马超知道这事。果然马超心里甚为疑惑，就直奔韩遂营帐索要书信观看。马超见书信中有的地方语义朦胧，一些关键处又被涂抹，便认为韩遂有异心，二人遂反目成仇，自相残杀起来。后来韩遂被迫投曹，马超败北。
曹睿即位，司马懿以顾命大臣身份任骠骑大将军，提督雍、凉等处兵马。诸葛亮得知消息，深感忧虑，认为司马懿颇有谋略，今提督雍、凉兵马，倘若训练成时，必为蜀中之大患，不如先起兵伐之。参军马谡说：“今丞相刚平定南中回师，军马疲弊，只宜存恤，岂可再次远征？某有一计，能使司马懿死于曹睿之手。”诸葛亮问是何计，马谡说：“司马懿虽是魏国大臣，但曹睿素怀疑忌之心，何不暗地派人前往洛阳、邺城等处散布流言，说司马懿欲谋反，使曹睿心疑，必杀此人。”诸葛亮深以为然，于是派人前往中原密行反间计。果然，司马懿欲谋反的消息传到曹魏朝廷，曹睿大惊失色。大臣华歆、王朗等人也都说，太祖皇帝（曹操）早就说过，司马懿有鹰视狼顾之相，又深明韬略，善晓兵机，且素有大志，不可付以兵权，久必为国家之祸。今日果然应验，可速诛之，以绝后患。曹睿遂立即下旨，欲兴兵御驾亲征。唯有中军大将军曹真认为司马懿无异志，说这必然是蜀、吴奸细所行反间之计，使我君臣自乱，彼即乘虚而击。曹睿听了